Dados do Trabalho

Título

O silenciamento da Rho GTPase RhoC não altera a capacidade de proliferação clonal de linhagens mieloides

Introdução

RhoC é uma proteína Rho GTPase que controla a dinâmica do citoesqueleto, participando do processo de proliferação celular. Esta função está desregulada em leucemias, porém o papel de RhoC ainda não está elucidado em células leucêmicas.

Objetivo

Neste estudo investigamos o efeito do silenciamento de RhoC na capacidade de proliferação clonal das linhagens celulares mieloides U937 e OCI-AML3.

Métodos

Células U937 e OCI-AML3 foram silenciadas através de transdução com lentivírus para RhoC ou lentivírus controle. A efetividade do silenciamento foi verificada por western blot. Para determinação da capacidade de proliferação clonal, as células controle (shCTRL) ou silenciadas para RhoC (shRhoC) foram cultivadas em duplicata em placas de cultura de 6 poços em meio semissólido de metilcelulose. O número de células cultivadas por poço foi inicialmente padronizado (500 e 100 células) e o número total de colônias formadas por células U937 e OCI-AML3 foi contado ao microscópio após 7 e 9 dias, respectivamente. Foram realizados pelo menos 3 experimentos independentes para cada ensaio.

Resultados

O silenciamento gênico por transdução lentiviral foi confirmado por western blot nas linhagens U937 e OCI-AML3. As células shRhoC apresentaram redução de mais de 80% na expressão proteica de RhoC em comparação às celulas shCTRL. Para realização do ensaio de proliferação clonal, o cultivo inicial de 100 células/poço se mostrou mais adequado. Na linhagem celular U937, observamos a formação de 101,33 ± 10,73 (média ± DP) colônias shCTRL versus 97,50 ± 11,62 colônias shRhoC. As células OCI-AML3 shCTRL formaram 96,00 ± 10,84 colônias versus 103,67 ± 15,16 colônias shRhoC.

Conclusões

A redução da proliferação em decorrência do silenciamento de RhoC já foi reportada em células tumorais, como em modelo de hepatocarcinoma, câncer de mama e câncer gástrico. Porém, nossos resultados indicam que RhoC não parece estar envolvida na proliferação clonal das linhagens mieloides U937 e OCI-AML3.

Palavras-chave

Rho GTPases, proliferação clonal, silenciamento

Financiador do resumo

FAPESP, processo número 2022/03171-0