Dados do Trabalho

Título

EFEITOS FUNCIONAIS DA SUPEREXPRESSÃO DO GENE EZH2 NA MALIGNIDADE DE TUMORES EMBRIONÁRIOS DO SISTEMA NERVOSO CENTRAL

Introdução

Os tumores pediátricos do sistema nervoso central são a principal causa de morte relacionada ao câncer entre crianças e adolescentes. Entre eles, se destacam os meduloblastomas (MED) e os tumores teratóides rabdóides atípicos (ATRT), pois apenas 40% dos pacientes ultrapassam 10 anos de sobrevida. Um potencial alvo de estudo é o Enhancer of Zeste Homolog 2 (EZH2), visto que é tipicamente superexpresso nesses tumores e já foi relacionado com maior agressividade e fenótipo tronco nos mesmos.

Objetivo

Caracterizar as linhagens USP7 (ATRT), USP13 (MED) e DAOY (MED) que foram transduzidas para superexpressar EZH2, para melhor compreender como esse fator de transcrição influencia o fenótipo tronco e o perfil proliferativo desses tumores.

Métodos

Primeiramente, realizamos a transdução das linhagens USP7, USP13 e DAOY através de um vetor lentiviral de superexpressão de EZH2 (variante OE), e de um vetor lentiviral para a expressão de GFP (variante controle). Após a transdução, os resultados da transdução foram validados por RT-qPCR e Western Blot. Com o fim da validação iniciamos o processo de caracterização das varientes OE. Para determinar a influência do EZH2 no perfil proliferativo das células utilizamos as varientes OE e controle em ensaios de crescimento celular em monocamada utilizando o equipamento XCELLigence, e ensaios de proliferação usando o kit de citometria de fluxo Click-iTTM EdU Alexa FluorTM 647. Por fim, fizemos a avaliação do efeito do EZH2 no fenótipo tronco utilizando as variantes OE e controle em ensaios clonogênicos e de formação de esferas para a determinação funcional de seu fenótipo tronco.

Resultados

A transdução das linhagens foi um sucesso, com todas variantes OE apresentando maiores níveis expressos de EZH2 na ordem de 6 a 29x em relação às controles. Morfologicamente, as variantes OE das linhagens USP7 e USP13 passaram a apresentar grandes células multinucleadas. Sobre o perfil proliferativo, apenas a linhagem DAOY apresentou maior proliferação após a superexpressão, enquanto as variantes OE das linhagens USP7 e USP13 mostraram menor proliferação quando comparadas com as células controles. No ensaio de EdU, a variante OE da linhagem USP7 se mostrou menos proliferativa do que a controle. As linhagens DAOY e USP13 não mostraram diferenças entre OE e controle. No ensaio clonogênico, as variantes OE das linhagens USP7 e DAOY formaram menos de colônias quando comparadas com as controles, enquanto a linhagem USP13 não mostrou nenhuma diferença. Por fim, as variedades OE das linhagens USP7 e DAOY formaram esferas menores que as controles, já a linhagem USP13 não mostrou diferença.

Conclusões

Devido aos resultados observados pode-se concluir que o EZH2 possui efeitos na proliferação e fenótipo tronco, porém os efeitos da superexpressão se mostraram em sua maioria deletérios, com apenas a linhagem DAOY apresentando um aumento na proliferação após a superexpressão. No entanto, devido ao seu papel como fator de transcrição, esses resultados podem ser explicados pelo contexto genético das linhagens estudadas, e por isso mais estudos ainda são necessários.

Palavras-chave

Tumores embrionários, EZH2, caracterização

Financiador do resumo

PIBIC - CNPq (nº do processo 2022-690)