Dados do Trabalho

Título

Os Efeitos da alta expressão do gene Ezh2 como mecanismo biológico para modelagem do estudo em tumores cerebrais.

Introdução

Tumores cerebrais são raros e mortais. Além de mudanças na sequência do DNA, alterações epigenéticas também vêm sendo demonstradas como essenciais na oncogênese destes tumores. Nesse sentido, o PRC2 um complexo enzimático que atua por meio da subunidade catalítica EZH2 modula a expressão gênica de diversos alvos e regula diferentes processos biológicos. Em câncer EZH2 pode controlar a progressão e agressividade tumoral, destacando-o como um potencial alvo terapêutico e de modelagem de estudos.

Objetivo

Tendo em vista a pluralidade funcional e seu importante papel no mau prognóstico de diversos tumores, inclusive cerebrais, o objetivo deste trabalho é avaliar a influência da alta expressão de EZH2 na diferenciação de células neurais e como um possível mecanismo de formação de tumores neurais.

Métodos

Para este projeto foi utilizado a linhagem de célula-tronco pluripotente induzida I9048 - célula derivada de fibroblastos humanos saudáveis e devidamente validada molecularmente para a expressão de marcadores de pluripotência. Para a geração do modelo celular, as células I9048 foram transduzidas com um vetor para superexpressão (overexpression, OE) ectópica de EZH2 (hEZH2-OE) ou com um vetor controle (CTRL-OE). As células infectadas foram selecionadas por resistência ao antibiótico puromicina. O nível de expressão de EZH2 foi avaliado por RT-qPCR e Western Blot. Para avaliar seu perfil proliferativo, as células hEZH2-OE e CTRL-OE foram submetidas a ensaios de crescimento (Xcelligence e contagem celular), proliferação (EdU) e ciclo celular (Iodeto de Propídeo). Além disso, as linhagens foram submetidas a ensaios de diferenciação neural por meio de cultivo em meios específicos de indução.

Resultados

Após a seleção das células I9048, houve aumento de 7 vezes na expressão gênica relativa do gene EZH2 nas células hEZH2-OE em relação às células CTRL-OE. O aumento na expressão proteica foi confirmado por Western Blot. Em relação ao crescimento celular, observamos um aumento significativo de pelo menos 3x do número de células no grupo hEZH2-OE em relação às CTRL-OE. No ensaio de proliferação, observamos significativa diferença, no número de células Hezh2 EdU+ em detrimento às CTRL-OE. Já no ensaio de ciclo os dados mostraram, acúmulo de células nas fases G0/G1 e diminuição de células nas fases G2/M na população hEZH2-OE em relação ao seu controle. Também observamos indícios de instabilidade genômica pelo acúmulo significativo de células polinucleadas nas células hEZH2-OE. O protocolo de diferenciação neural foi bem-sucedido e diferenças morfológicas foram observadas entre os grupos, como diferenças nos padrões da irradiação de neurônios em células CTRL-OE em comparação hEZH2-OE.

Conclusões

A alta expressão ectópica do gene Ezh2, permitiu de fato um estado mais proliferativo do grupo hEZH2-OE em relação ao seu controle e este padrão pode ter influências sobre o processo de diferenciação neural. Os dados obtidos até o momento são positivos e colaboram com a proposta do projeto visto que EZH2 pode ter potencial oncogênico por aumentar a proliferação de células tronco e induzir o acúmulo de células multinucleadas.

Palavras-chave

tumores cerebrais, EZH2, Célula tronco pluripotente.

Financiador do resumo

CAPES e FAPESP