Dados do Trabalho

Título

Efeito do 5-AzadC em linhagem de carcinoma de células escamosas oral (CCEO) exposta à fibroblastos associados ao câncer (CAF)

Introdução

O carcinoma de células escamosas oral (CCEO) modula o microambiente tumoral (TME) através da reprogramação epigenética. Os fibroblastos associados ao câncer (CAF), principal componente do TME, colabora com a progressão, invasão e resistência quimioterápica do CCEO. Drogas epigenéticas, como o 5-AzadC, despontam como adjuvantes no tratamento de CCEO, especialmente para casos agressivos ou não responsivos às terapias convencionais. Entretanto, os princípios que norteiam a interação entre células de CCEO e CAF, na presença de um agente desmetilante, ainda são desconhecidos.

Objetivo

Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do 5-AzadC em linhagem celular derivada de CCEO (SCC-9) exposta à fibroblastos associados ao câncer (CAF-11).

Métodos

Células SCC-9, CAF-11 e NOF-5 (fibroblasto oral normal) foram tratadas individualmente com 0,3 e 1,0 μM de 5-AzadC durante 24h e 48h e investigadas quanto a sua morfologia, através de fotomicrografias em microscópio óptico de contraste de fase. O controle do 5-AzadC foi seu veículo (PBS), em volume igual a maior concentração utilizada da droga. As células SCC-9, em presença de meio condicionado por CAF-11 (MCcaf) ou dos controles (MCctrl e MCnof), foram tratadas com 0,3 e 1,0 μM de 5-AzadC e investigadas quanto a sua morfologia e viabilidade celular com ensaios de MTT. Já os efeitos do 5-AzadC em células SCC-9 na presença de células CAF-11 foram investigados a partir de ensaios em co-cultivo direto com transwells, seguida de análises morfológicas e viabilidade celular.

Resultados

Análises morfológicas revelaram que o tratamento com 5-AzadC por 48h reduziu o número de células SCC-9 e promoveu aumento do seu conteúdo citoplasmático, fato evidenciado nas concentrações mais elevadas. Por outro lado, CAF-11 e NOF-5 não apresentaram alterações morfológicas notórias. Na presença de MCcaf, o tratamento com 5-AzadC promoveu alterações morfológicas ainda mais significativas nas SCC-9, em comparação ao MCctrl e MCnof, vistas sobretudo no aumento do conteúdo citoplasmático, sem redução do número de células. Estes dados foram confirmados pelos ensaios de MTT, no qual as SCC-9 tiveram viabilidade significativamente aumentada quando tratadas com 0,3 μM de 5-AzadC na presença do MCcaf, em comparação ao MCnof na mesma concentração da droga. Porém, em 1,0 μM de 5-AzadC, os efeitos de MCcaf foram similares ao MCnof. Estes achados foram potencializados nos ensaios de co-cultivo em transwells, que evidenciaram o aumento da viabilidade das SCC-9 co-cultivadas com CAF-11, independentemente da presença ou concentração de 5-AzadC.

Conclusões

Portanto, nas condições especificadas, o 5-AzadC não foi capaz de superar os efeitos causados pela presença de células CAF ou pelos fatores contidos em seu meio condicionado, no tangente a viabilidade e morfologia celular de SCC-9. Portanto, reitera-se a importância da inserção de componentes do microambiente tumoral na realização dos estudos in vitro com terapia epigenética em linhagens neoplásicas.

Palavras-chave

5-Aza-2’-desoxicitidina. Fibroblasto associado ao câncer. Carcinoma de células escamosas oral.

Financiador do resumo

CAPES, nº processo: 88882.434536/2019-01