Dados do Trabalho

Título

Avaliação in vitro do efeito antitumoral de células CAR-T (Chimeric Antigen Receptor T cells) contra linhagens celulares de tumores hematológicos

Introdução

A terapia com células CAR-T é uma nova abordagem de imunoterapia que consiste no reconhecimento direto do tumor por linfócitos T modificados para expressarem receptores quiméricos. Atualmente, o CAR-CD19 é o único clinicamente aprovado para linfoma e leucemia, porém alguns pacientes apresentam a perda de expressão tumoral de CD19 ou falta de resposta efetiva. Para isso, surge a necessidade de explorar novos alvos tumorais para terapias com CAR-T contra linhagens de tumores hematológicos.

Objetivo

O objetivo consiste em estudar a atividade antitumoral in vitro de células CAR-T com receptor bi-específico para GSCT2 e GSCT3 em diferentes linhagens de tumores hematológicos positivas para tais alvos.

Métodos

As linhagens de tumores hematológicos utilizadas para o projeto foram selecionadas através da detecção de expressão positiva dos antígenos alvos GSCT2 e GSCT3, por meio da quantificação de expressão gênica por qRT-PCR e proteica por citometria de fluxo. Foram utilizados linfócitos T primários, que foram transduzidos com o gene do receptor CAR por meio de lentivírus. A efetividade da transdução foi verificada por meio de citometria de fluxo.
Foi realizado o co-cultivo das células tumorais com linfócitos T CD3+ não-transduzidos e transduzidos com CAR, em três proporções diferentes de células tumorais para linfócitos (razão alvo : efetor), 1:1, 1:5 e 1:10. A proporção para o co-cultivo com as células CAR-T foi calculada considerando o número total de células, não sendo realizada a correção pela taxa de transdução. Em seguida, foi realizada a análise de viabilidade celular para verificar o efeito antitumoral das células CAR-T em comparação com as células não transduzidas.

Resultados

Foram selecionadas quatro linhagens de tumores hematológicos para o estudo deste projeto: THP1, U937, OCI-AML3 e Jurkat, sendo as três primeiras linhagens de leucemia mielóide aguda (LMA) e a última de leucemia aguda de células T. As linhagens de LMA apresentaram alta porcentagem de células positivas para GSCT2 e GSCT3 enquanto a linhagem Jurkat apresentou expressão positiva apenas para GSCT2, o que é endossado pela literatura.
A citometria de fluxo para detecção do CAR mostrou que a transdução dos linfócitos T CD3+ resultou em 7% de células efetivamente transduzidas com CAR. Pela análise de viabilidade do co-cultivo, foi possível observar que os linfócitos CAR-T apresentaram maior atividade antitumoral em comparação com os linfócitos não transduzidos, sendo esse aumento crescente conforme a proporção alvo : efetor.

Conclusões

Foi observada atividade antitumoral de células CAR-T com alvo para GSCT2 e GSCT3 em linhagens tumorais de LMA e leucemia aguda de células T positivas para GSCT2 e/ou GSCT3 in vitro. É interessante notar que apesar da pequena proporção de linfócitos efetivamente transduzidos com CAR para células tumorais ainda houve atividade antitumoral elevada, o que mostra grande efetividade dessas células CAR-T contra células tumorais.

Palavras-chave

Imunoterapia, CAR-T, tumores hematológicos

Financiador do resumo

CNPq 2022-1349