Dados do Trabalho

Título

Caracterização histológica de modelos pré-clínicos de meduloblastoma SHH pediátrico para futuros ensaios terapêuticos

Introdução

Meduloblastoma (MB), tumor maligno com origem no cerebelo, representa 20% dos tumores do Sistema Nervoso Central na pediatria. Para o MB associado à via de sinalização Hedgehog (MB-SHH), os modelos de camundongos geneticamente modificados (GEMM) têm sido amplamente utilizados, já que permitem estudar os mecanismos da tumorigênese e a biologia do tumor. Assim, selecionamos camundongos Math1-CrePtch1loxP, para estabelecer um modelo de camundongo propício a desenvolver o MB-SHH do tipo pediátrico.

Objetivo

Estabelecer modelo pré-clinico de meduloblastoma SHH utilizando camundongos transgênico Math1-CrePtch1loxP. Avaliar as características clínicas dos animais para a identificação dos sinais de presença de tumor e determinação dos estágios de progressão da lesão tumoral.

Métodos

Foram utilizados camundongos transgênicos Math1-Cre e Ptch1loxP, provenientes da Jackson’s Laboratory (USA). Os camundongos gerados Math1-CrePtch1loxP, e as matrizes, foram mantidos no biotério do Hospital de Câncer de Barretos. O modelo, obtido por tecnologia de edição gênica, permite a perda seletiva de genes flanqueados por sequências de sítios LoxP, clivados pela enzima Cre recombinase, levando a eliminação do gene Ptch1 em promotores Math1, expresso nos precursores de células granulares (GNPs). A confirmação do genótipo de interesse foi realizada pela técnica de PCR. Os animais foram acompanhados semanalmente, e os testes motores foram realizados para identificar alterações na passada do animal e correlacionar com as etapas da progressão tumoral. Os animais com presença de doença foram eutanasiados em diferentes estágios do tumor. As amostras tumorais foram fixadas em paraformaldeido 4%, e encaminhadas para analise histopatológica (H&E) e de imunohistoquímica (GFAP e Ki67).

Resultados

Após os cruzamentos das linhagens Math1-Cre e Ptch1lox-P, foram gerados 70 filhotes que foram avaliados quanto a presença do genótipo (transgênico para Cre e homozigoto para loxP), favorável para o desenvolvimento de MB-SHH. Os animais transgênicos-Cre/loxP-homozigotos (n=14) desenvolveram tumor com 100% de penetrância. Entre os sintomas observados logo após o nascimento (PN), destacam-se, o retardo no crescimento, a perda de peso, a cifose lombar e o aumento do perímetro cefálico. O teste de comprimento da passada foi capaz de detectar, em estágios iniciais da doença, o comprometimento motor com manifestação de sequelas significativas na 8° semana após o nascimento. A avaliação macroscópica das lesões coletadas entre a 4ª e 8ª semana PN, destacam a presença de massa tumoral, com aumento progressivo do volume tumoral, comprometendo toda a porção do cerebelo. A avaliação histológica, e de imunhistoquimica, indicaram extensa proliferação de células da camada granular, presença de lesões hiperplásicas, áreas de necrose e aumento da vascularização.

Conclusões

Os resultados, ainda preliminares, baseado na caracterização dos animais, sugere o estabelecimento de modelo pré-clinico de MB-SHH representativo da população pediátrica. A caracterização histológica das lesões, nas diferentes fases do desenvolvimento, visa contribuir com uma melhor compreensão da biologia e da evolução tumoral, facilitada pela presença dos astrócitos no microambiente. Além disso este modelo visa contribuir para futuros ensaios terapêuticos.

Palavras-chave

Meduloblastoma, SonicHedgehog, animal geneticamente modificado.

Financiador do resumo

FAPESP – número do processo: 2022/15067-2; CNPq – número do processo: 310287/2021-9; Hospital de Câncer de Barretos; Ministério Público do Trabalho (MPT)