Dados do Trabalho

Título

OncoXenoPlat: Estabelecimento e caracterização de linhagens celulares primárias e modelos PDX de tumores de Sistema Nervoso Central

Introdução

Os tumores do Sistema Nervoso Central (SNC) são a principal causa de morte relacionada ao câncer infantil. Sua complexidade histopatológica e molecular tornam a tomada de decisões clínicas especialmente desafiadora. Neste contexto, a necessidade de maior entendimento sobre a biologia destes tumores pode ser assistida por esforços no desenvolvimento de modelos pré-clínicos, como a implementação de modelos in vitro e in vivo, importantes na identificação de biomarcadores e busca de novos tratamentos.

Objetivo

Estabelecer e caracterizar linhagens celulares primárias e modelos Patient Derived Xenograft (PDX) a partir de tecido tumoral de pacientes pediátricos diagnosticados com ependimoma, glioma de baixo ou alto grau ou meduloblastoma no Hospital de Câncer InfantoJuvenil de Barretos (HCB).

Métodos

Amostras de tumor de SNC dos pacientes foram coletadas durante cirurgia e imediatamente criopreservadas, utilizadas para o estabelecimento de linhagem primária e para desenvolvimento dos modelos PDX. Para o estabelecimento de linhagens primárias o tecido tumoral foi processado pela remoção de vasos sanguíneos e áreas necróticas e dissociação celular mecânica e química por ação de acutase. As linhagens foram pareadas com DNA do sangue do paciente para confirmação por análise por STR e caracterizadas quanto a proliferação celular, clonogenicidade e perfil imunocitoquímico de ki-67, Sinaptofisina, GFAP, EMA e Vimentina. O tecido tumoral foi fragmentado, embebido em matrigel e administrado subcutaneamente em camundongos NSG ou NU/J. O crescimento tumoral foi monitorado com paquímetro e, ao atingir volume de aproximadamente 100 mm3, os tumores dos animais (P0) foram removidos, dissociados e reimplantados em sucessivos animais receptores, representando passagens.

Resultados

O projeto foi aprovado pelo CEP (protocolo nº 6.134.758) e pela CEUA (protocolo nº 014/2021), ambos do HCB. As linhagens celulares primárias tiveram confirmação de pareamento por análise de STR. Foram estabelecidas 6 linhagens primárias de ependimoma (HCB586, HCB591, HCB596, HCB601, HCB562 e HCB605); 5 linhagens de glioma (HCB570, HCB577, HCB589, HCB604 e HCB607); e 6 linhagens primárias de meduloblastoma (HCB592, HCB597, HCB598, HCB602, HCB603, HCB606). O número de passagens para cada linhagem, até o momento, varia entre 3 a >10. Quando submetidas aos ensaios de proliferação celular, as linhagens HCB591 e HCB597, HCB603 e HCB605 demonstraram, respectivamente, alta, alta, intermediária e baixa taxa proliferativa. Em relação aos modelos PDX, foram gerados 2 modelos de glioma (OXP9 e OXP22) e 3 modelos de ependimoma (OXP2, OXP24 e OXP29), em passagens que variam de 1 a 6. As amostras tumorais coletadas dos modelos PDX apresentaram similaridades histopatológicas e de imunohistoquímica com as amostras primárias dos pacientes.

Conclusões

Foi estabelecido um painel pré-clínico de linhagens celulares primárias e modelos PDX de tumores de SNC à medida que os pacientes pediátricos com ependimoma, glioma ou meduloblastoma passaram por procedimento cirúrgico no HCB a partir de 2021. As linhagens estão em processo de caracterização e serão comparadas aos tumores dos modelos PDX, possibilitando maior compreensão sobre a biologia do tumor, identificação de novos biomarcadores e terapias integradas em estratégias de medicina personalizada.

Palavras-chave

Tumores de SNC; Ependimoma; Glioma; Meduloblastoma; Painel pré-clínico; Linhagens celulares tumorais primárias de SNC; Modelos PDX de tumores de SNC.

Financiador do resumo

Ministério Público do Trabalho (MPT); Hospital de Câncer de Barretos processo nº 13/2021.