Dados do Trabalho

Título

Impacto do silenciamento do fator de transcrição PBX1 na expressão de genes da via de angiogênese em linhagem de câncer de mama

Introdução

O câncer de mama (CM) é o tipo mais comum de câncer entre mulheres em todo o mundo e, estima-se que, no Brasil, para o triênio 2023-2025, 30% de todos os casos de câncer representem o CM. Entre os hallmarks do câncer, a angiogênese é um fator necessário para a progressão tumoral e metástase. Assim, as terapias antiangiogênese são uma estratégia promissora para retardar a evolução dos tumores. O fator de transcrição PBX1, tem sido associado a vários tipos de câncer, envolvido em vários aspectos da tumorigênese, porém, a relação entre PBX1 e angiogênese em câncer de mama ainda não foi descrita.

Objetivo

Investigar o padrão de expressão de PBX1 nos subtipos moleculares de câncer de mama, identificando genes da via de angiogênese com expressão correlacionada ao PBX1 para avaliar o impacto funcional do silenciamento de PBX1 em linhagem celular, e consequente modulação da expressão em genes envolvidos nesta na via no contexto do câncer de mama.

Métodos

A análise da expressão de PBX1 no CM foi realizada em amostras de pacientes do TCGA. Foram comparadas a expressão de PBX1 em amostras dos subtipos moleculares em relação às amostras não tumorais. A expressão de 38 genes relacionados à angiogênese foi comparada com o gene PBX1 no CM nos grupos luminal A e basal (TCGA). O silenciamento de PBX1 foi realizado por transfecção com siPBX1 e controle negativo e, a expressão de PBX1 foi analisada após 24 e 48 horas. No ensaio clonogênico, após a transfecção, as células foram cultivadas por 14 dias e as colônias coradas com cristal violeta. A análise da expressão gênica de PBX1, de três genes relacionados à via de angiogênese: TIMP1, ANGPTL4 e VEGF e dois controles: ACTB e TBP, foi realizada através de PCR quantitativa. As quantificações relativas foram realizadas pelo método 2–ΔΔCT. Valores de p<0,05 foram considerados significativos em todos os experimentos.

Resultados

A expressão de PBX1 é maior nas amostras luminais em comparação com tecido não tumoral (p < 0,05). Na busca de genes com expressão correlacionada com PBX1, destacamos a correlação inversa de PBX1 com TIMP1 (p<0,0001), um conhecido fator antiangiogênico, importante por inibir a ação de metaloproteases no subtipo luminal A. O silenciamento de PBX1 não causou impacto na viabilidade ou proliferação celular, mas houve diminuição significativa (p<0,5) na capacidade clonogênica. Buscando entender melhor a relação entre a expressão de PBX1 e a via de angiogênese, além de analisar o efeito em TIMP-1, dois fatores pró-angiogênicos, a ANGPLT4 e o VEGFA foram avaliados quanto à sua correlação com PBX1 por meio de RT-qPCR. O fator antiangiogênico, TIMP1, apresentou expressão aumentada (p< 0,5), enquanto os fatores angiogênicos como VEGFA e ANGPLT4 tiveram uma redução significativa em sua expressão após o silenciamento de PBX1 (p<0,01).

Conclusões

Com base no exposto, nossos dados sugerem que o fator de transcrição PBX1 desempenha um papel oncogênico na linhagem de câncer de mama Luminal A. Esta hipótese surge após o silenciamento de PBX1, onde obervou-se diminuição da capacidade clonogênica, aumento da expressão de TIMP1 (antiangiogênico) e diminuição de VEGFA e ANGPTL4 (proangiogênicos). Estratégias terapêuticas que combinem a inibição de VEGFA e de PBX1 podem aumentar a eficiência no controle da promoção tumoral.

Palavras-chave

PBX1, câncer de mama, angiogênese

Financiador do resumo

CAPES, CNPq.