Dados do Trabalho

Título

Avaliação in vitro da influência da IL-2 na plasticidade de Linfócitos Tumor Infiltrantes obtidos de carcinoma mamário e Linfócitos T esplênicos de camundongos Balb/c

Introdução

As alterações de células tumorais são reconhecidas pelo sistema imunológico a fim de serem combatidas e eliminadas. Os linfócitos T são importantes na defesa antitumoral e se dividem em T citotóxicos (CD8+) e auxiliares (CD4+), estes subdivididos em perfis que expressam fatores de transcrição: Th1 (Tbet), Th2 (GATA3), Th17 (RORγT) e Treg (FOXP3). Esses linfócitos encontrados no microambiente tumoral são chamados de Linfócitos Tumor Infiltrantes podendo ser usados como terapia celular adotiva.

Objetivo

Analisar a plasticidade dos linfócitos T esplênicos e dos perfis de Linfócitos Tumor Infiltrantes com ou sem estímulo de IL-2 obtidos de camundongos BALB/c induzidos ao carcinoma mamário pela linhagem celular 4T1.

Métodos

Pesquisa aprovada pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA) da Universidade Federal do Triângulo Mineiro sob o parecer Nº 1/2021/CEUA/PROPPG, PROCESSO Nº 23085.008739/2020-24. Este é um modelo experimental, no qual os camundongos passaram por indução tumoral com células 4T1, e após 28 dias foram eutanasiados, com retirada do tumor e baço e suas células redirecionadas para cultura, divididas em quatro grupos: (I) células esplênicas estimuladas com IL-2, (II) células esplênicas sem adição de IL-2, (III) células do microambiente tumoral estimuladas com IL-2 e (IV) células do microambiente tumoral sem adição de IL-2. Após 15 dias de cultura foi realizada a citometria de fluxo com marcações de moléculas extra e intracelulares. A análise foi realizada no citômetro de fluxo FACS CALIBUR e para análise dos dados foi utilizado o software GraphPad Prism 9.

Resultados

Houve um aumento na expressão de RORγT e GATA3 na cultura de células esplênicas sem IL-2, havendo uma diminuição da expressão dos mesmos quando adicionado IL-2 (p<0,0001). Na cultura de células tumorais, FOXP3 teve sua expressão aumentada sem a adição de IL-2, enquanto na cultura com IL-2 sua expressão diminui drasticamente (p<0,0001), igualando-se a expressão de Tbet, além da expressão de GATA3 e RORγT também aumentar. As citocinas TNF-α e IL-17, também tiveram expressão aumentada na cultura de células tumorais com IL-2 quando comparado sem esse estímulo (p<0,0001), resultado contrário à cultura de células esplênicas, onde TNF-α e IL-17 diminuíram na cultura com estímulo de IL-2 (p<0,0001).

Conclusões

Ao observar as células tumorais e esplênicas nota-se que a resposta imunológica sistêmica é diferente da encontrada no microambiente tumoral, colaborando para o entendimento da resposta imunológica global. Por fim, concluímos que a utilização da IL-2 in vitro como estímulo de linfócitos tumor infiltrantes é promissora para a sua utilização como terapia complementar adotiva. Essa citocina mostrou-se eficaz na mudança de perfil dos linfócitos T, principalmente do subtipo Treg, de forma indireta.

Palavras-chave

Linfócitos; TIL´s; IL-2

Financiador do resumo

FAPEMIG