Dados do Trabalho

Título

DETECÇÃO DA PRESENÇA DE METÁSTASE LINFONODAL EM LINFONODO SENTINELA POR MARCADORES MOLECULARES E BIÓPSIA ASPIRATIVA EM PACIENTES COM MELANOMA – PLATFORM2

Introdução

O melanoma é uma neoplasia potencialmente letal, com incidência crescente no Brasil e no mundo. As metástases linfonodais podem ser diagnosticadas em baixo volume através da pesquisa do linfonodo sentinela (LS), técnica minimamente invasiva de biópsia. Este diagnóstico é crucial como fator prognóstico e área de intensa pesquisa clínica com recentes avanços nas terapias sistêmicas no cenário adjuvante e neoadjuvante.

Objetivo

Padronizar a detecção de metástase linfonodal em LS por marcadores moleculares e biópsia aspirativa em pacientes com melanoma.

Métodos

Projeto aprovado pelo Comitê de Ética Institucional sob o registro CAAE: 56753822.0.0000.5437, número 2327/2022. Os pacientes incluídos assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido e foram submetidos à pesquisa do LS no dia da cirurgia linfocintilográfica. Antes da excisão do LS, fez-se a Punção Aspirativa com Agulha Fina (PAAF) guiado pelo gama probe e ultrassonografia intraoperatória. O material coletado no PAAF foi diluído em Phosphate Buffered Saline (PBS) 1x, congelado a -80°C e, posteriormente, submetido à extração de RNA usando o kit RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation (Invitrogen). A
quantificação se efetuou por espectrofotometria com NanoDrop 2000 (ThermoFisher). Após estas etapas, a avaliação da expressão dos genes de interesse será realizada por Droplet Digital Polimerase Chain Reaction (ddPCR). O linfonodo sentinela biopsiado seguiu para análise anatomopatológica (AP) e imunoshistoquímica para o diagnóstico de metástase/micrometástase de melanoma.

Resultados

Foram incluídos 3 pacientes no estudo. Mulher, 34 anos, branca, com lesão no tornozelo, Breslow 2,1mm, Clark IV, Índice Mitótico 3/mm², ausência de ulceração (pT3a), mutação BRAF V600 detectada. O AP do LS detectou metástase linfonodal, sem metástase à distância com estadiamento clínico IIIB. Foram coletadas duas PAAF do LS, com concentrações de 24 e 20ng/µL pós-extração de RNA. Homem, pardo, 75 anos, com melanoma acral lentiginoso no hálux, AP indicando Breslow 4,8mm, Clark IV, Índice Mitótico 1/mm² e ulceração (pT4b), mutação BRAF V600 não detectada. Foram realizadas duas PAAF de LS diferentes com concentrações de 6 e 31,5ng/µL pós-extração de RNA. O AP do LS indicou metástase. Mulher, 35 anos, com melanoma extensivo superficial na região dorsal, AP indicando Breslow 7,1mm, Clark IV, Índice Mitótico 17 mitoses/mm², ulceração (pT4b) e mutação BRAF V600 detectada. Foram realizadas coletas de dois LS para o estudo, cujo AP apontou metástase; ainda sem resultados da extração de RNA.

Conclusões

O projeto caracteriza-se como um teste piloto, sendo possível concluir, diante os resultados parciais, que as concentrações de RNA são suficientes para realizar uma análise da expressão gênica por ddPCR. Dessa forma, será possível dimensionar a viabilidade da extração de biópsia líquida por PAAF no LS, possibilitando futuros testes moleculares para observar metástases de melanoma.

Palavras-chave

Melanoma, Linfonodo Sentinela, PAAF