Dados do Trabalho

Título

Níveis proteicos de PIMREG aumentam em células de glioblastoma que acumulam dano no DNA induzido por radiação ionizante

Introdução

PIMREG é uma proteína nuclear com sua função relacionada à carcinogênese, pois sua expressão está aumentada em vários tipos de câncer. Vimos que, em gliomas, a expressão do transcrito de PIMREG é relacionado à progressão tumoral e à sobrevida dos pacientes, além de o seu knockdown interferir na sinalização das proteínas quinases ATM, RPA e aumentar a sensibilidade das células de glioblastoma submetidas a tratamento, indicando um possível papel de PIMREG nas vias de sinalização de dano ao DNA.

Objetivo

Investigação da participação de PIMREG em vias de sinalização de dano no DNA, especificamente àquelas induzidas por radiação ionizante (RI), visto que é um dos tratamentos principais para glioblastoma e uma das principais formas de acionamento de quebra de dupla fita no DNA.

Métodos

Células de linhagem de glioblastoma T98G, semeadas na concentração de 1,6x10^6 (placa 100 mm), foram submetidas à radiação ionizante (4 Gy) e coletadas após um período de 30 minutos, 1 hora, 1 hora e 30 minutos e 2 horas. Foram analisados os níveis proteicos de PIMREG e de phospho-H2AX (Ser139), por meio de Western Blot e a intensidade de fluorescência por imunofluorescência. Ensaios de ciclo celular e apoptose, foram realizados a fim de se analisar se viabilidade celular e as fases do ciclo celular foram afetadas após a irradiação.

Resultados

A indução de células T98G com RI resultou no aumento da expressão de PIMREG. É possível analisar, por meio de WB, que após 30 minutos de irradiação, há um aumento de nível proteico de PIMREG, atingindo seu pico em 1 hora e seu mínimo em 2 horas. Concomitantemente, visualiza-se um mesmo padrão de aumento seguido de diminuição – com pico em 1 hora – de phopho-H2AX (Ser139), indicador de dano ao DNA, reforçando uma possível participação de PIMREG nas vias de dano e reparo no DNA. Nos ensaios de imunofluorescência pudemos observar o aumento de intensidade de fluorescência de PIMREG e pH2AX até o seu pico em 1 hora e o seu decaimento a partir de 1 hora e 30 minutos, refletindo o que foi observado por WB. Os ensaios de ciclo celular e apoptose mostraram que as células irradiadas se mantiveram viáveis e não apresentaram alteração no ciclo celular em todos os tempos analisados.

Conclusões

A expressão proteica de PIMREG é induzida em células submetidas ao dano por RI. Seu acúmulo seguido de redução seguiu o mesmo comportamento observado para pH2AX (Ser139) – reforçando resultados anteriores que associam a sua participação na resposta ao dano do DNA. Nos próximos passos, iremos avaliar o nível proteico de proteínas relacionadas a estas vias em células nocautes e superexpressas de PIMREG, a fim de elucidar seu papel e posicionamento em vias de sinalização de dano ocasionado por RI.

Palavras-chave

PIMREG, glioblastoma, radiação ionizante

Financiador do resumo

Processo FAPESP 2022/13336-6