Dados do Trabalho

Título

Impacto de inibidores epigenéticos na regulação in vitro de linfócitos T CD8 humanos

Introdução

Linfócitos TCD8 são células chaves na resposta antitumoral. Uma vez ativadas, as células TCD8 sofrem mudanças epigenéticas, adquirem fenótipos distintos e sua função está ligada ao potencial citotóxico e produção de mediadores inflamatórios. Porém, na resposta antitumoral, tais células encontram-se disfuncionais. Assim, estratégias capazes de reprogramar as células TCD8 podem aumentar sua eficácia. Estudos prévios mostram que inibidores epigenéticos são capazes de modular o perfil de células TCD4, mas os efeitos em células T CD8 ainda permanecem por serem esclarecidos.

Objetivo

Neste estudo, temos como objetivo identificar possíveis inibidores epigenéticos que sejam capazes de modular a atividade e o perfil fenotípico de linfócitos T CD8.

Métodos

Linfócitos TCD8 foram isolados por sorting celular a partir de PBMC de doadores saudáveis e cultivados em placas de 96 poços (fundo U) na presença de coquetel de ativação (DynaBeads antiCD3/CD28, IFN-γ e IL-2 recombinantes) e 1uM de diferentes inibidores epigenéticos (MS023, A485, L-MOSES, A-196, GSKLSD1, A366). Linfócitos T CD8 não estimulados e linfócitos T CD8 ativados na ausência de inibidores epigenéticos foram utilizados como controles. Após 4 ou 8 dias de cultura, as células foram coletadas e analisadas por citometria de fluxo para avaliação de marcadores ligados à ativação (CD69), função (IFN-γ e granzima B, CD107a), diferenciação (CCR7, CD45RA) e exaustão (PD-1, TIGIT). As células foram adquiridas no citômetro de fluxo BD FACSymphony A5 e a análise estatística foi realizada utilizando o software GraphPad Prism 9. Este estudo obteve aprovação do comitê de ética 2710/19.

Resultados

Primeiramente, realizamos ensaios in vitro nos quais células TCD8 foram ativadas na presença ou não de diferentes inibidores, e dois destes apresentaram potencial de modular células T CD8: o inibidor de PRMT1, MS023 e o inibidor do bromodomínio p300/CBP, A485. A ativação de células TCD8 na presença de MS023 resultou no aumento da frequência de células granzima B+ em relação ao controle estimulado. Já o inibidor A485, por sua vez, aumentou a ativação celular, observada a partir do aumento da frequência de células TCD8 CD69+. Esse inibidor também foi capaz de modular o fenótipo de diferenciação das células, dirigindo-as para um perfil TN/TSCM, diferentemente do controle e dos outros inibidores, que direcionaram para um perfil TEM (células T efetoras de memória). Quando as análises foram realizadas após oito dias de cultura, observamos que o tratamento com o inibidor A485 resultou em menor frequência de células PD-1+ em comparação às células TCD8 ativadas na ausência de inibidor.

Conclusões

A partir destes dados, podemos concluir que inibidores epigenéticos são ferramentas potenciais para a modulação de células TCD8. Dentre os inibidores testados, observamos que o tratamento com MS023 aumentou a frequência de células TCD8 granzima B+. Além disso, destacamos a atividade do A485, capaz de aumentar a ativação celular, dirigir a diferenciação de células TCD8 para um perfil TN/TSCM e diminuir a frequência de células PD-1+. O perfil de TN/TSCM já foi mostrado como favorável em imunoterapias, logo esses achados se tornam interessantes para possíveis terapias combinadas.

Palavras-chave

Modulação Epigenética, Linfócitos T CD8, Inibidores Epigenéticos

Financiador do resumo

FAPESP; CNPQ