Dados do Trabalho

Name: Next Frontiers to Cure Cancer
Start: 2023-09-15
End: 2023-09-16
Location: Expo Center Norte (Pavilhão Amarelo)

Título

PAPEL DA ENZIMA ANTIOXIDANTE SULFIRREDOXINA NA REGULAÇÃO REDOX EM CÉLULAS PROSTÁTICAS BENIGNAS E TUMORAIS.

Introdução

O câncer de próstata (CaP) é o segundo câncer maior em prevalência e mortalidade masculina no Brasil. Suas etapas mais avançadas têm como tratamento a radioterapia e quimioterápicos, onde o mecanismo de ação baseiam-se na produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) que causam danos letais as células tumorais. Estudos recentes demonstraram que em estágios avançados do CaP há uma superexpressão da enzima antioxidante sulfirredoxina (Srx), correlacionado ao pior prognóstico

Objetivo

A partir disso o presente trabalho tem como objetivo avaliar a relação da exposição com H2O2 com a viabilidade celular e expressão gênica da Srx em diferentes linhagens celulares de CaP após o knockdown, além de investigar o papel da Srx na regulação e interação no balanço REDOX.

Métodos

Para realizar tais avaliações foram utilizadas quatro linhagens prostáticas, sendo elas a PNT-2 (célula benigna); LNCaP (tumorais e sensível à andrógenos) e DU145 e a PC3 (tumorais avançadas e resistentes à castração). Para a avaliação do papel da Srx no balanço REDOX, inicialmente as células foram semeadas e silenciadas utilizando siRNA contra o mRNA da Srx na concentração de 25nM nos tempos de 24h, 48h e 72h. Posteriormente foi feita a extração das proteínas, a fim de avaliar os níveis totais de glutationa (GSH) e as atividades das enzimas antioxidantes catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD) por protocolos in house. Já para as análises de com exposição a H2O2, as células foram semeadas, silenciadas e tratadas com H2O2 nas doses de 25 e 125µM e cultivadas por 24h. Após esse tempo foram realizadas os experimentos de viabilidade por MTT e análise de expressão gênica para sulfirredoxina (SRXN1) por qRT-PCR.

Resultados

Os resultados obtidos demonstraram que após 48h de silenciamento a linhagem benigna (PNT-2) demonstrou um decréscimo na atividade da catalase e nos níveis de GSH, permanecendo até o tempo de 72h. Já na linhagem LNCaP houve um aumento expressivo nos níveis de GSH após 48h, além de um aumento na atividade de CAT na linhagem DU145 após 24h. Porém, os resultados mais promissores vieram da linhagem PC-3, onde houve uma diminuição de GSH em todos os tempos analisados, além de um crescimento da atividade de CAT após 48h até 72h e um crescimento de SOD após 48h de silenciamento. Já as analises de viabilidade celular após a exposição a H2O2 demonstrou uma diminuição na viabilidade da PNT-2 após exposição de ambas as doses (25/125µM), porém sem correlação com a expressão da Srx (SRXN1). Porém, nas células tumorais (LNCaP e DU145) a dose mais alta foi capaz de reduzir a viabilidade e aumentar a expressão de Srx, já na linhagem PC-3 apenas a maior dose de H2O2 foi capaz de alterar sua viabilidade, porém mesmo a menor dose foi capaz de alterar os níveis de expressão de Srx, demonstrando seu importantíssimo papel nessa linhagem mesmo em baixas exposições de EROs

Conclusões

Os resultados demonstraram que linhagens DU145 e PC-3 possuem mecanismos de regulação de EROs mais dependentes da Srx quando comparados com a linhagem normal e que tratamentos que utilizem a inibição dessa enzima possam ser muito úteis na clínica como tratamento adjuvante aos já utilizados, podendo obter resultados mais específicos, promissores e trazer uma maior sobrevida aos pacientes.